在治疗性抗体生产中，聚集体杂质是一个普遍存在的问题。细胞培养过程中形成的聚集体是产品相关杂质的重要类别，不仅会降低抗体药物的生物活性，还可能诱发免疫反应。聚集通常源于暴露的疏水区域相互作用、二硫键异构化以及分子间结构域交换，因此抗体自身的理化特性在聚集体形成过程中往往起主导作用。尽管聚集体可能在整个生产过程中产生，但细胞培养收获液中的聚集体含量通常最高。除抗体本身固有的性质外，细胞株、培养基、培养条件、轻重链比例等多种因素也会影响聚集体的形成。对于易于聚集的抗体，即便对上述因素进行了优化，收获液中的聚集体水平仍可能偏高。因此，在控制聚集形成的同时，还需建立高效、稳健的下游纯化工艺，以确保将聚集体去除至安全水平。

　　抗体纯化过程中，不溶性与可溶性聚集体的去除方式各异：前者可通过过滤直接去除，后者则需依靠层析技术。蛋白A亲和层析作为捕获步骤，虽有一定去除聚集体的能力，但其效果往往不够稳健。洗脱条件的轻微波动便会影响去除率，如低pH洗脱液会带来聚集体的潜在风险。因此，确保抗体药物纯度的核心环节，主要在于后续的精纯层析步骤。本文通过不同层析方法对聚集体的去除案例，探究抗体药物中聚集体去除的填料选择策略。

阳离子交换层析

　　阳离子交换层析（CEX）被广泛用作抗体药物下游纯化的精纯步骤之一，能够有效去除聚集体、电荷异质体等产品相关杂质。赛分科技阳离子交换填料Proteomix POR50-XS以亲水化改性聚苯乙烯/二乙烯基苯（PS/DVB）为基质，粒径均一，具有高分辨率、高柱效和高回收率的特点，广泛应用于抗体、疫苗、核酸等样品的下游纯化。

纯化案例

　　样品信息：某双抗样品，上样载量：60 mg/mL

疏水层析

　　疏水层析是去除抗体聚集体的有效手段，常以流穿模式运行。由于聚集体通常较单体疏水性更强，可通过优化上样条件（如盐浓度），使聚集体选择性结合至填料，而单体则保留在流穿液中。对于中等疏水性的填料，需在一定盐浓度范围内进行筛选以实现该分离；而对于疏水性更强的填料，即使在较低盐浓度（如0.05 M NaCl）下也能实现同等去除效果。低盐条件可避免高盐对目标蛋白活性或下游步骤的潜在不利影响，从而更具优势。

　　赛分科技疏水层析填料Agarosix HC45-HIC Phenyl以高刚性琼脂糖为基质，其表面具有高度亲水性，最大程度地避免了与生物类样品的非特异性吸附。疏水层析条件温和，不易引起生物分子的变性与失活，生物大分子的疏水性基团在高盐条件下与填料表面的疏水配基结合，在低盐条件下解吸附，从而分离疏水性差异的不同生物分子。Agarosix HC45-HIC Phenyl填料分辨率高、反压低，可广泛适用于抗体、重组蛋白、质粒等生物样品的中纯和精纯阶段。

纯化案例

　　样品信息：某双抗样品，上样载量：14 mg/mL

复合模式层析

　　复合模式阳离子交换填料是一款专为高效去除聚集体而设计的填料。除了离子相互作用外，其配体还可介导疏水相互作用和氢键作用。不同粒径的复合模式阳离子交换填料，由于其的颗粒尺寸和配体密度均有所差异，从而使填料在单体与聚集体之间具有不同的选择性。在去除聚集体时，复合模式阳离子层析通常以结合-洗脱模式进行操作。

　　赛分科技复合阳离子交换填料Agarosix MC75-MMC的基质为6%交联度琼脂糖凝胶，同时具有疏水及阳离子交换性能，合适的间隔臂选择使生物分子更加有效地与可及的配位体结合，可广泛适用于抗体、蛋白等生物样品的分离和纯化。

纯化案例

　　样品信息：某单抗样品，上样载量：50 mg/mL

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订购信息

　　注：包装规格为1 L，5 L, 10 L, 50 L，预装柱规格为1 mL, 4.2 mL, 5 mL

　　*参考文献：

　　[1] Zhang X, Chen T, Li Y. A parallel demonstration of different resins' antibody aggregate removing capability by a case study. Protein Expr Purif. 2019 Jan；153:59-69. doi: 10.1016/j.pep.2018.08.011.